Диагностика герпеса: какие анализы сдавать?
Инфекция генитального герпеса (ВПГ, HSV) распространена во всем мире, и эпидемиологические исследования демонстрируют рост уровня инфицирования повсеместно. Генитальный герпес – одна из причин язвенных поражений половых органов. Герпетическую инфекцию провоцируют типы ВПГ 1 или ВПГ- 2. Большинство случаев генитального герпеса связано с ВПГ-2, но также рассматривается инфицирование и ВПГ-1.Клиническая картина первого эпизода генитального герпеса среди пациентов с инфекциями ВПГ-1 и ВПГ-2 схожа, частота и тяжесть рецидивов меньше с ВПГ-1, чем с ВПГ-2. Кроме того, тяжесть первого эпизода и реактивация при инфекции ВПГ-2 ниже у пациентов с предшествующим ВПГ-1. Необходимо отметить, что большинство герпинфекций являются бессимптомными или недиагностированными. Герпетическая инфекция может проявляться атипично, что затрудняет постановку диагноза. Большинство случаев передачи вируса партнеру или от матери к новорожденному происходит в отсутствие клинических симптомов. Проводились исследования, которые показали, что ВПГ повышает риск ВИЧ-инфицирования. Антивирусная терапия уменьшает клиническое проявления ВПГ, что значительно снижает риск передачи.
Оглавление: 1. Прямые методы - Стандартная вирусная культура - РИФ при герпесе - Цзанк-мазок - Электронная микроскопия 2. Обнаружение ДНК-вируса 3. Косвенные серологические анализы - Иммуноферментный анализ ИФА, иммуноблоттинг 4. Тестирование при резистентности 5. С какими заболеваниями проводят дифференциальную диагностику при герпесе
Диагностика герпеса важна для определения тактики ведения, но анализы на герпес не входят в скрининговые исследования.
Есть множество способов для выявления ВПГ, и клинический диагноз генитального герпеса всегда должен подтверждаться лабораторными исследованиями, включая серотипирование, поскольку серотип влияет как на прогноз, так и на схему терапии. Окончательный диагноз генитального герпеса устанавливается на основании визуализации специфических признаков в области гениталий, с выделением вируса, либо с обнаружением антигена. В некоторых лабораториях обнаружение ДНК ВПГ с использованием методов молекулярной диагностики заменяет выделение вирусной культуры и ИФА-диагностику. Серологические анализы проводят у пациентов с симптомами герпетической инфекции, когда прямые методы демонстрируют отрицательные результаты, при отсутствии симптоматики и для определения прошлой или настоящей инфекции.
На результаты лабораторной диагностики ВПГ влияют следующие аспекты:
- тип теста;
- качество полученного образца,
- возможности лаборатории;
- интерпретация результатов.
Прямые методы
Прямые тесты подтверждают присутствие ВПГ в подозрительном очаге или в выделениях из половых органов. В идеальном варианте анализируют образец из везикулы, которая появилась менее 24 часов назад.
Если есть множество пузырьков, аспирируют содержимое из нескольких. По данным исследований, чувствительность анализа ниже у пациентов с рецидивирующими поражениями, чем у пациентов с первыми эпизодами.
В некоторых случаях электронная микроскопия жидкого биоматериала может дать положительный результат. Эта процедура, хотя и является быстрой, относительно нечувствительна, и положительные результаты появляются только при внешних поражениях (высыпания на ягодицах или бедрах, реже на слизистых оболочках). Жидкость для анализа предпочтительнее взять из целого везикула, используя туберкулиновый шприц, при этом достаточно аспирации содержимого в иглу.
Капля высушивается на воздухе и рассматривается с помощью микроскопа.
В некоторых лабораториях применяют молекулярные методы для обнаружения и типирования ВПГ. Образцы, взятые для выделения или обнаружения антигена, также подходят для методов детектирования ДНК. Повышенная чувствительность ПЦР-диагностики, основанная на амплификации нуклеиновых кислот, по сравнению с другими прямыми методами (обнаружение культуры или антигена), позволяет анализировать материал с минимальным количеством патогенных частиц.
Стандартная вирусная культура
Посев на питательную среду – золотой стандарт для обнаружения ВПГ, специфичность 100% для ВПГ-1 и ВПГ-2, чувствительность зависит от стадии герпетической инфекции и времени получения образца.
Чувствительность варьируется от 75% для первых эпизодов до 50% для рецидивов.
РИФ при герпесе
Окрашивание материала производится специальным флюоресцентным веществом, с последующим микроскопированием.
Обнаружение вирусного антигена – альтернатива культурального метода диагностики, способ может помочь, когда при неправильной обработке и транспортировке образцов может инактивироваться любой присутствующий вирус.
Для подтверждения ВПГ чувствительность анализа аналогична или выше, чем у культуральных способов.
Обнаружение антигенов ВПГ возможно с помощью тестов DFA или иммунопероксидазных анализов на фиксированных и обработанных образцах клеток.
Цзанк-мазок
Герпетическая инфекция вызывает типичные цитопатические изменения в генитальных эпителиальных клетках). Они увеличиваются в размерах, появляются внутриядерные включения, часто визуализируются многоядерные клетки. После специальной окраски образцы исследуют с помощью светового микроскопа.
Недостатки: этот метод имеет низкую чувствительность и не отличает ВПГ-1 от ВПГ-2. Кроме того, аналогичная картина может быть, например, при ветряной оспе.
Для подтверждения диагноза необходимы более чувствительные анализы.
Электронная микроскопия
Прямое исследование везикулярной жидкости или другого клинического материала с помощью электронной микроскопии для диагностики ВПГ ограничено тем, что морфология вируса также не позволяет отличать ВПГ от других вирусов герпеса (например, вирус ветряной оспы). Этот традиционный метод был в значительной степени заменен флюоресцентным окрашиванием мазков, что обеспечило специфичную для конкретного типа дифференцировку HSV-1 и HSV-2.
Обнаружение ДНК-вируса
Вирусная ДНК может быть обнаружена методами гибридизации с использованием радиоактивно меченых или биотинилированных образцов. Эти методы в значительной степени были заменены более чувствительными и менее трудоемкими исследованиями, которые используют амплификацию целевой ДНК ВПГ с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Специфичность метода амплификации обеспечивается либо проведением повторной ПЦР-диагностики с целевыми специфическими праймерами, либо с помощью ВПГ-специфической гибридизации с амплифицированными продуктами.
В случае возможного генитального герпеса ПЦР обнаруживает вирусную ДНК в течение нескольких дней после того, как поражения не содержат демонстративного инфекционного вируса. Это значит, что способ диагностики, основанный на амплификации нуклеиновой кислоты, может выдать положительный результат даже в том случае, когда наступило симптоматическое выздоровление, и лечение уже не требуется.
Отрицательные результаты посева обычно подтверждаются ПЦР-диагностикой. Чувствительность ПЦР выше, чем стандартный посев культуры. Появление ПЦР в режиме реального времени минимизировало риск ложноположительных результатов.
Косвенные серологические анализы
Около 8-10 мл крови собирают в пробирку без антикоагулянта или консервантов. После ее свертывания при комнатной температуре сыворотку центрифугируют и помещают в другую пробирку. Если необходимо хранение в течение нескольких недель, сыворотку охлаждают при 4 ° C или замораживают при температуре ниже -20 ° C. Цельную кровь замораживать не рекомендовано из-за гемолиза, что делает образец непригодным для серологического тестирования.
Анализ для обнаружения антител к ВПГ назначают, когда другие вирусологические исследования не могут быть выполнены или дают отрицательные результаты). Это особенно актуально при бессимптомном носительстве инфекции.
Серологические тесты для ВПГ могут применяться в следующих случаях:
- исследование передачи герпетической инфекции партнеру;
- первый эпизод инфекции, особенно у беременных;
- рецидивирующее течение ВПГ;
- обследование дискордантных пар,
- планирование беременности (мужчина позитивен, женщина отрицательна);
- отягощенный акушерско-гинекологический анамнез с подозрением на герпетическую инфекцию;
- скрининг на ИППП;
- обследование у ВИЧ-инфицированных пациентов для выявления ВПГ-2.
Хотя многие серологические анализы выявляют антитела к ВПГ, установить конкретный тип (1 или 2) не представляется возможным.
Между ВПГ-1 и ВПГ-2 существует тесная серологическая связь, каждый из них кодирует серологически отличный гликопротеин G (gG-1 и gG-2). Эта разница была использована при разработке серологических тестов, специфичных для конкретного типа.
Иммуноферментный анализ ИФА, иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг (WB) – стандарт для обнаружения антител к ВПГ. Анализы имеют высокую чувствительность и способность различать антитела к ВПГ-1 и ВПГ-2. Происходит реакция с выделением фиксированных белковых матриц («блоттов») из лизатов клеток ВПГ-1 или ВПГ-2.
Наибольшую диагностическую ценность представляет определение IgM-антител, которые появляются примерно через 2 недели с момента инфицирования, либо присутствуют в крови при хронической инфекции или ее активации.
IgG определяются при длительном существовании инфекции в организме или при ее активации.
ИФА-метод может быть количественным (определение титра антител, чем выше, тем острее процесс) и качественным (присутствие вируса, тип, антитела, предшествующие рецидивы).
Определение антител к предранним белкам вируса помогает судить о длительности процесса.
Расшифровка анализа ИФА на герпес:
- IgM «-» , IgG к предранним белкам «+», IgG поздние «+» / первичная острая инфекция или ее рецидив.
- IgM «-», IgG к предранним белкам «-», IgG поздние «+» / есть иммунный ответ к вирусу герпеса (носительство).
- IgM «+», IgG к предранним белкам «+», IgG поздние «-» / первичная острая инфекция.
- IgM «+», IgG к предранним белкам «+», IgG поздние «+» / первичная острая инфекция.
- IgM «-» , IgG к предранним белкам «-», IgG поздние «-» / норма, свидетельствующая об отсутствии патологического процесса.
Тестирование при резистентности
Существует ряд противовирусных препаратов для лечения инфекций ВПГ; из них чаще назначают Ацикловир. Устойчивость ВПГ к Ацикловиру растет, причем почти все клинически значимые штаммы, устойчивые к Ацикловиру, диагностируются у пациентов с ослабленным иммунитетом, особенно у ВИЧ-инфицированных. Развитие резистентности обычно возникает в результате мутаций в вирусном геноме, а наличие избирательного действия препарата приводит к появлению устойчивой популяции вирусов. Выделение ВПГ из сохраняющихся поражений, несмотря на адекватные дозы, подозрительно на резистентность к Ацикловиру.
С какими заболеваниями проводят дифференциальную диагностику при герпесе
Дифференциальная диагностика проводится со следующими патологиями:
- синдром Бехтеча (неинфекционный васкулит, характеризующийся орогенитальными афтозными язвами, поражением кожи и глаз и вовлечением ЦНС, желудочно-кишечного тракта и суставов);
- кандидоз;
- мягкий шанкр;
- вирус Коксаки;
- опоясывающий герпес;
- сифилис;
- болезнь Крона;
- некоторые дерматозы;
- паховая гранулема и пр.
Мишина Виктория, уролог, медицинский обозреватель
8,752 total views, 2 views today
(49 голос., средний: 4,02 из 5)
Загрузка...
