Диагностика протозойных инфекций

Не все простейшие (Protozoa), паразитирующие у человека, являются возбудителями заболеваний. Для обнаружения вида возбудителя и подтверждения клинического диагноза не обойтись без методов лабораторной диагностики. Простейшие, поселившиеся в организме человека, могут находиться в разных стадиях своего развития.

Оглавление: 
Классы паразитов и исследуемые биоматериалы 
Частные виды диагностики
- Диагностика корненожек (амёб)
- Диагностика ресничных (инфузорий) 
- Диагностика жгутиконосцев (лейшманий, лямблий, трипаносом, трихомонад)
- Выявление споровиков (малярийного плазмодия, возбудителя кокцидоза и пр.)
3. Основные методы исследования простейших
- Диагностика простейших методом нативного мазка и мазка, окрашенного раствором Люголя (в кале)
- Метод консервации (исследование кала) при диагностике простейших
- Метод формалин-эфирного обогащения (анализ на наличие простейших в кале)
- Метод нахождения лейшманий (мазок костного мозга)
- Метод обнаружения лейшманий в мазке из кожного инфильтрата
- Метод выделения чистой культуры лейшманий, полученных путем соскоба патологических тканей

Классы паразитов и исследуемые биоматериалы

Подразделяются простейшие на 4 класса:

корненожки (Rhizopoda) – представлены у человека амёбами;
жгутиконосцы (flagellata) – основной патологический представитель – лейшмании;
ресничные (ciliata) инфузории – самый распространенный возбудитель болезни – балантидий;
споровики (sporozoa) – опасный паразит этой группы – малярийный плазмодий.

При инцистировании микроорганизм приобретает округлую форму и покрывается защитной оболочкой. В форме цисты простейшие становятся маловосприимчивыми к неблагоприятным факторам среды.

Локализация патогенных микроорганизмов может быть в разных органах и тканевых структурах. Поэтому выбор материала для исследования зависит от того, где может находиться паразит.

Исследованию могут подвергаться:

кровь;
костный мозг;
содержимое абсцессов (в печени, легких, мозге);
содержимое полостей (брюшной, плевральной, перикардиальной);
мокрота;
моча;
кал;
слизь и экссудаты кишечника, свищей.

Обратите внимание: разновидностей диагностики очень много, мы рассмотрим те виды, которые наиболее распространены в клинической лабораторной практике.

Частные виды диагностики

В каждом конкретном случае перед лаборантом ставится задача нахождения определенного возбудителя, иногда попутно с основным обнаруживаются и другие.

Диагностика корненожек (амёб)

Насчитывается 6 видов этого микроорганизма, способного к обитанию в кишечнике человека. Клиническое значение имеет только дизентерийная амёба, встречающаяся в вегетативной форме и в виде цист.

Основной путь обнаружения паразита – исследование в нативном (необработанном) биологическом препарате.

Дополнительно применяются иммунологические методы:

непрямой иммунофлюоресценции;
непрямой агглютинации (РНА);
радиальной иммунодиффузии.

Обратите внимание: серологические методы малоинформативны и применяются лишь как дополнение к основным в сомнительных случаях.

Диагностика ресничных (инфузорий)

Патогенная форма микроорганизмов этого рода – балантидий. Это микроб, вызывающий балантидиаз – болезнь, сопровождающуюся язвенным процессом толстого кишечника. Возбудитель обнаруживается в нативном мазке в виде вегетативной формы и цисты. Материал для мазка (кал и слизь) забирается при ректороманоскопическом исследовании и высевается на специальные среды.

Рекомендуем прочитать: 
Балантидиаз: симптомы, лечение и профилактика

Диагностика жгутиконосцев (лейшманий, лямблий, трипаносом, трихомонад)

Для человека представляют опасность лейшмании, трипаносомы, лямблии, трихомонады.

Лейшмании – микробы, вызывающие лейшманиоз, исследуются в мазках крови, материалах костного мозга, соскобов из кожных инфильтратов. В некоторых случаях при диагностике лейшманий применяется посев на питательные среды.

Рекомендуем прочитать: 
Лейшманиозы: причины, симптомы, диагностика, лечение и профилактика

Трипаносомы – возбудители сонной болезни (американский/африканский трипаносомоз, или болезнь Шагаса).

Африканский вариант определяют в начальном периоде при исследовании периферической крови. Патологические микробы при прогрессировании болезни находятся в материале пункций лимфоузлов, в запущенных стадиях – в спинномозговой жидкости.

Возбудителя Американского трипаносомоза в острую фазу болезни можно найти в жгутиковой форме. В дальнейшем безжгутиковые паразиты находятся в мышечных клетках, миокарде, в нейронах центральной нервной системы.

Для диагностики трипаносом при подозрении на болезнь Шагаса исследуемый материал обследуется под микроскопом при малом увеличении. При этом мазки и толстую каплю предварительно окрашивают.

Лямблии, ведущие паразитический образ жизни в двенадцатиперстной кишке находят в желчи или в анализе кала (цисты).

Рекомендуем прочитать: 
Лямблиоз: симптомы, лечение и диагностика

Трихомонады (кишечная, ротовая, влагалищная) обнаруживаются при микроскопии материалов, взятых из пораженных слизистых оболочек.

Выявление споровиков (малярийного плазмодия, возбудителя кокцидоза и пр.)

Споровики – паразитические формы, обитающие в клетках, тканях и полостях организма.

Наиболее распространенный и опасный для человека вид – малярийный плазмодий, имеющий 4 основные разновидности возбудителя: возбудитель трехдневной малярии, четырехдневной малярии, тропической малярии и малярии овале.

Рекомендуем прочитать: 
Малярия: причины, симптомы, диагностика, лечение и профилактика

Половое развитие плазмодия (спорогония) проходит в комарах Анофелес. Бесполое (тканевая и эритроцитарная шизогония) – в печеночной ткани и эритроцитах человека. Эти особенности жизненного цикла обязательно учитываются при диагностике малярийного плазмодия.

Так, у только что заболевшего больного в крови можно обнаружить половые клетки цикла спорогонии. А вот на высоте малярийных приступов в крови в большом количестве появляются шизонты.

Более того, в разные фазы малярийной лихорадки проявляются различные формы плазмодия:

в период озноба кровь наполняется мерозоитами, разновидностью шизонтов;
на высоте температуры в эритроцитах скапливаются кольцевидные трофозоиты;
снижение температуры характеризуется преобладанием амебовидных трофозоитов;
в периоды нормального состояния кровь содержит взрослые формы шизонтов.

Исследование возбудителя малярии (малярийного плазмодия) проводится в мазке и в толстой капле.

Морфологические формы паразитов для четкой дифференциации анализируются путем специфического окрашивания. Этот вариант «визуализации» позволяет разобрать индивидуальные морфологические особенности той или иной разновидности микроорганизма.

Обратите внимание: диагностика малярии при исследовании мазков и толстых капель крови иногда бывает ошибочной. Тромбоциты крови в некоторых случаях могут ошибочно быть причислены к малярийному возбудителю. Также иногда симулируют плазмодий фрагменты лейкоцитов и других клеток.

Основные методы исследования простейших

Кратко ознакомимся с самыми распространенными методами исследования на наличие простейших.

Диагностика простейших методом нативного мазка и мазка, окрашенного раствором Люголя (в кале)

Препарат готовится из эмульсии кала в изотоническом растворе. На предметное стекло наносятся две капли натрия хлора и рядом раствор Люголя. В оба состава деревянной палочкой добавляют исследуемый материал и после накрывания стеклом просматривают в разных разрешениях микроскопа.

По определенным признакам регистрируют найденных простейших. Для точности готовят 2-3 препарата из одного материала. В сомнительных случаях анализ повторяют несколько раз на протяжении 2-3-х недель.

Методом можно обнаружить вегетативные и цистные формы:

лямблий;
балантидий;
дизентерийной амебы.

Вместе с патогенными формами определяются и непатогенные простейшие. Также у здоровых носителей находятся просветные и цистные формы.

Важно: исследования во избежание неточностей и ошибок следует проводить неоднократно.

Результат диагностики простейших методом нативного и окрашенного мазка должен содержать описание формы возбудителя (просветная, циста, тканевая).

Требования к исследованию:

забранный на анализ материал (жидкий кал) исследуется не позднее 30 минут после дефекации;
оформленный кал необходимо подвергнуть диагностике в течение 2 часов после дефекации;
в материале не должно быть примесей (дезинфицирующих средств, воды, мочи);
для работы с материалом используют только деревянные палочки, стеклянные не пригодны из-за соскальзывания слизи;
палочки после использования немедленно необходимо сжигать.

Метод консервации (исследование кала) при диагностике простейших

Исследование проводится путем фиксации простейших с консервантом. Отличие этого метода от предыдущего в том, что консерванты позволяют сохранить препарат в течение длительного периода.

Используемые консерванты:

Барроу. Содержит консервирующие ингредиенты: 0,7 мл хлорида натрия, 5 мл формалина, 12,5 мл 96% спирта, 2 г фенола и 100 мл дистиллированной воды. Красящий состав: 0,01% раствор тионина (азура).
Раствор Сафарлиева. Состав: 1,65 г сульфата цинка, 10 мл формалина, 2,5 г кристаллического фенола, 5 мл уксусной кислоты, 0,2 г метиленового синего, 100 мл воды. Этот консервант используется в случаях, когда материал должен храниться более месяца.

Консервантом наполняются пустые флаконы, в них переносят материал, в пропорциях 3:1, затем при необходимости добавляют краситель. Оценка результатов производится при исследовании 2-3-х препаратов.

Метод формалин-эфирного обогащения (анализ на наличие простейших в кале)

Этот способ диагностики позволяет отделить и сконцентрировать цисты простейших. Для анализа нужны следующие ингредиенты: формалин (10 мл), 0,85 г изотонического раствора, дистиллированная вода, серный эфир, раствор Люголя.

Смесь биоматериала с перечисленными жидкостями смешивают и центрифугируют. Полученный на дне пробирки осадок окрашивают раствором Люголя и исследуют на предмет наличия цист и вегетативных форм.

Метод нахождения лейшманий (мазок костного мозга)

Для диагностики лейшманиоза используются реактивы: смесь Никифорова (серный эфир и этиловый спирт), фосфатный буфер, Азур-эозин по Романовскому.

Вещество костного мозга очень осторожно помещают на предметное стекло после специальной подготовки. Используется микроскоп с иммерсионной системой.

В острый период болезни в пунктате обнаруживается большое количество лейшманий.

Обратите внимание: иногда кровяные клетки могут напоминать обработанные лейшмании, поэтому очень важно лаборанту быть внимательным и иметь достаточный опыт для самостоятельного исследования.

Метод обнаружения лейшманий в мазке из кожного инфильтрата

Необходимые реактивы аналогичны предыдущему анализу.

Исследуемый материал получают из имеющегося бугорка или язвенного содержимого. Соскоб при подозрении на лейшманиоз делается очень аккуратно скальпелем, без крови. Затем готовится препарат на стекле. Для точности получаемых результатов одновременно подвергают осмотру несколько препаратов.

При наличии заболевания среди присутствующих в исследуемом материале макрофагов, фибробластов, лимфоидных клеток определяются и лейшмании.

Метод выделения чистой культуры лейшманий, полученных путем соскоба патологических тканей

При этом способе диагностики простейших соскоб тканей помещают в специальную питательную среду, в которой происходит активное размножение лейшманий.

Перед забором соскоба кожу тщательно обрабатывают спиртом, затем делается надрез бугорка, со дна которого извлекается содержимое и помещается в пробирку со средой. Материал забирается несколько раз, после чего он помещается в разные пробирки. Затем в термостате при температуре 22-24 градуса происходит культивирование. Результаты оценивают под микроскопом. Этот метод применяется, когда другие, более дешевые и быстрые способы диагностики простейших неэффективны.

Увидеть, как на практике расшифровываются анализы на наличие простейших по капле крови, вы сможете, посмотрев видео-обзор: